中药制剂理化鉴别的方法.ppt

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1、第一节第一节 必备知识必备知识一、理化鉴别的意义 中药制剂的理化鉴别是利用其药味中药制剂的理化鉴别是利用其药味(原料药原料药)中的中的某种或某类指标性成分的理化性质，通过化学分析方某种或某类指标性成分的理化性质，通过化学分析方法和仪器分析方法，检测有关成分在制剂中是否存在，法和仪器分析方法，检测有关成分在制剂中是否存在，进而对所含药味与处方的一致性做出判断，达到鉴定进而对所含药味与处方的一致性做出判断，达到鉴定药品真伪之目的。药品真伪之目的。药品真实性的检定是药品质量控制的重要内容，药品真实性的检定是药品质量控制的重要内容，是评价药品质量的重要依据。如果药品缺乏真实性，是评价药品质量的重要依据

2、。如果药品缺乏真实性，则可判定为不合格药品，并以假药论处。则可判定为不合格药品，并以假药论处。理化鉴别是以制剂药味中的指标性成分（主要为有效成分或特征性成分）为检测对象，故可以更加客观深刻地评价药品的真实性。对于液体制剂或其它不含原料药粉的制剂，理化鉴别则显得为重要。目前中国药典收载的理化鉴别方法有：一般化学鉴别法、微量升华法、荧光鉴别法、分光光度法、薄层色谱法、气相色谱法和高效液相色谱法等。其中色谱法尤其是薄层色谱法得到广泛的应用，这主要是由于色谱法具有分离分析双重功能，从而大大提高了鉴别工作的灵敏度和专属性，并成为今后中药制剂鉴别的发展方向。鉴别方法鉴别方法 应用品种应用品种说说 明明薄层

3、色谱薄层色谱114高效液相色谱高效液相色谱4 气相色谱气相色谱3主要鉴别挥发性成分主要鉴别挥发性成分分光光度法分光光度法0一般化学反应法一般化学反应法2荧光鉴别法荧光鉴别法0微量升华法微量升华法0显微鉴别法显微鉴别法29适用于含药粉的剂型适用于含药粉的剂型 一般化学反应法是利用检测试剂与制剂中的指标性成分发生化学反应，根据所产生的颜色、沉淀或气体等现象，来判断某些成分或某些药味的有无。由此可见，所谓一般化学反应法即通常所说的显色反应和沉淀反应。1.一般化学反应法具有操作简便，适用性较强等特点。2.其否定功能往往强于肯定功能,专属性较差。3.易发生假阳性或假阴性反应假阳性或假阴性反应克服方法如下

4、：对样品进行预处理，除去干扰性成分，富集被检成分。选用专属性较强的检测试剂。必要时做阳性或阴性对照试验加以验证，保证其专属性和灵敏度。主要用于制剂中生物碱、黄酮类、蒽醌类、皂苷、香豆素、萜类以及各种矿物类成分的鉴别 （一）生物碱 1.碘化铋钾反应 产生红棕色沉淀 2.碘化汞钾反应 产生类白色沉淀 3.硅钨酸反应 产生白色沉淀 4.苦味酸反应 产生黄色结晶性沉淀 需在酸性条件下进行。注意事先排除其它成分的干扰。少数生物碱不与上述通用沉淀试剂反应，而具有专属性较强的其它反应。而具有专属性较强的其它反应。最多使用的检识反应为盐酸镁粉反应，呈紫红色。大山楂丸（山楂）、抗骨增生丸（淫羊藿）、参茸保胎丸（

5、黄芩）等。此外，黄芩提取物采用二氯氧锆-盐酸显色反应进行检识。主要应用碱液反应（Borntrager反应），阳性反应呈红色，加酸红色褪去呈黄色。例如大黄流浸膏。常用的定性鉴别反应有：泡沫反应 样品水溶液振摇后，产生持久性泡沫。醋酐浓硫酸反应 甾体皂苷呈现污绿色，三萜皂苷呈现红、红紫色。浓硫酸反应 呈现红、红紫色。三氯化锑或五氯化锑反应 氯仿液呈紫兰色。氯仿浓硫酸反应 氯仿层出现红色或兰色，并具绿色荧光。例：地奥心血康胶囊（黄山药和穿山龙薯蓣的提取物）、养心定悸膏（甘草、红参、麦冬）。常用的检识反应有：氯亚氨基-2，6-二氯醌-四硼酸钠反应（Gibbs反应），呈现蓝色。异羟肟酸铁反应 呈红色。应

6、用品种有：养阴清肺膏（牡丹皮）、前列舒丸（牡丹皮）等。（六）挥发性成分 主要使用香草醛浓硫酸反应检识此类成分，正反应呈红、红紫色。应用品种主要有：万应锭（冰片）、牛黄解毒片（冰片）、养心定悸膏（桂枝、生姜）等。朱砂、石膏、雄黄等为中成药中常见的矿药。1.朱砂（主含HgS）主要采用铜片反应。HgS+2HCl+CuCuCl2 2+Hg（白）+H2 2S 天王补心丹等中成药中朱砂的鉴定。2.石膏、牡蛎、海螵蛸等 此类药物均富含钙盐，主要采用草酸铵反应。CaSO4 4+(NH4 4)2 2C2 2O4 4CaC2 2O4 4（白）+(NH4 4)2 2SO4 4 CaC2 2O4 4溶于盐酸，难溶于醋

7、酸。CaC2 2O4 4+2HClCaCl2 2+H2 2C2 2O4 4 止咳桔红口服液（石膏）、安胃片（海螵蛸）、龙牡壮骨颗粒（牡蛎、龙骨、乳酸钙、葡萄糖酸钙等）3.雄黄（主含As2S2）（1）氯化钡沉淀法（检出硫）AsAs2 2S S2 2+KClO+KClO3 3+4HNO+4HNO3 3 2K2K3 3AsOAsO3 3+H+H2 2SOSO4 4+Cl+Cl2 2+4NO+4NO H H2 2SOSO4 4+BaCl+BaCl2 2 BaSOBaSO4 4（白）（白）牙痛一粒丸 （2）硫化氢反应（检出砷）2As2As2 2S S2 2+7O+7O2 2 2As 2As2 2O O3

8、 3+4SO+4SO2 2 As As2 2O O3 3+3H+3H2 2O 2HO 2H3 3AsOAsO3 3 2H 2H3 3AsOAsO3 3+3H+3H2 2S AsS As2 2S S3 3(黄)+6H+6H2 2O O AsAs2 2S S3 3在盐酸中析出黄色沉淀，并溶于碳酸铵中 4As4As2 2S S3 3+12(NH+12(NH4 4)2 2COCO3 3 4(NH4(NH4 4)3 3AsOAsO3 3+4(NH+4(NH4 4)3AsS)3AsS3 3+12CO+12CO2 2 小儿惊风散等。o 常含有较多的蛋白质或氨基酸、故鉴别此类药物，常使用茚三酮反应，正反应呈红

9、紫色。例如：龟龄集（鹿茸、海马、等）、参茸保胎丸（阿胶、鹿茸）等。（1）供试液的制备（见前述）（2）操作方式 大多为试管反应，或在检测试纸上、或在蒸发皿（坩埚）中进行反应 五、结果判断 将反应现象或结果与药品标准对照，若一致则符合规定。若不一致则判定为不符合规定。试管反应一般使用210cm试管，取供试液12ml。加入检测试液时，试管应稍倾斜，试液应沿试管内壁逐滴加入，滴管下口不得触及内壁。加入反应试液后一般需振摇试管，使之与供试液混匀。振摇时应缓缓摇摆振摇，不得上下振摇，手指不允许堵塞试管口，若需层反应，则不得振摇试管。一般需在白色背景下观察反应所产生的颜色或沉淀，若沉淀为白色或类白色则需在黑

10、色背景下观察。如果反应需加热，一般在水浴中加热。用试管夹夹持试管，内容物不得超过容积的2/3，试管应倾斜45度，试管口不得闭塞，并不得朝向人。加热有机溶液绝对不允许使用明火热源。如果反应需无水条件，必须保持试管、蒸发皿等容器的干燥，例如醋酐浓硫酸反应。1.千柏鼻炎片2.小儿清热止咳口服液3.茴香橘核丸4.地奥心血康胶囊5.养阴清肺膏6.安胃片7.天王补心丹8.牙痛一粒丸9.中风回春片 本法是利用某些成分的升华性，在一定温度下将其从制剂中升华分离出来，并以升华物所具有的某些理化性质作为制剂鉴别的依据。升华法具有简便、实用等特点，由于升华性仅为少数中药化学成分所具有且升华物纯度较高，故该法专属性亦

11、较好。大多采用微量升华法，少数使用坩埚法或蒸发皿法，在此，仅介绍微量升华。六味地黄丸中冰片升华物六味地黄丸中冰片升华物显微镜下观六味地黄丸中冰片升华物香草醛浓硫酸显色 升华时应缓缓加热，温度过高，易使药粉焦化，在载玻片上产生焦油状物，影响对升华物的观察或检识。温度的控制可通过调整酒精灯火焰与石棉板的间距来实现。样品粉末用量一般约0.5g，过少不易产生足够量的升华物。可在载玻片上滴加少量水降温，促使升华物凝集析出。无金属片，可用载玻片代替。(一)万应锭的鉴别（二）小儿惊风散的鉴别（反应机理）（三）明目地黄丸的鉴别 荧光鉴别法是利用制剂中某些成分，如黄酮类、蒽醌类、香豆素类等在可见光或紫外光照射下

12、能产生一定颜色荧光的性质，对中药制剂进行鉴别。有的成分本身不具荧光性，但加酸、碱处理后，或经其它化学方法处理后也可产生荧光供鉴别用。本法操作简便、灵敏，具有一定的专属性。例如大黄和土大黄，前者显棕色至棕红色荧光，而后者显亮蓝色荧光，很容易区分。取中成药的提取液点加于滤纸上或加入蒸发皿中，置紫外光灯（365nm）下约10cm处观察所产生的荧光。必要时可在供试品上加酸、碱或其它试剂，再观察荧光及其变化。荧光强度较弱，故一般需在暗室中观察荧光。供试液一般用毛细管吸取，少量多次点加在滤纸上，使斑点集中且具有一定浓度。紫外光对人的眼睛和皮肤有损伤，操作者应避免与紫外光较长时间接触。（一）元胡止痛片（二）

13、五味麝香丸（三）热炎宁颗粒 基于相同物质在同一的色谱条件下，表现出相同的色谱行为这一基本规律，在同一块薄层板上点加供试品和对照物，在相同条件下展开，显色检出色谱斑点后，将所得供试品与对照物的色谱图进行对比分析，从而对药品进行定性鉴别。（一）简便、快速、易普及、具有分离和分析双重功能，且采用共薄层对照分析法共薄层对照分析法，故专属性亦较强。（二）系统适用性试验。(05版药典新增)1.检测灵敏度 2.分离度 3.重复性1.1.检测灵敏度检测灵敏度 主要用于限量检查.采用供试品溶液和对照品溶液与稀释若干倍（10倍）的对照品溶液在规定的色谱条件下，于同一块薄层板上点样、展开、检视，后者应显示清晰的斑点

14、。2.2.分离度分离度 用于鉴别时，对照品溶液与供试品溶液中相应的主斑点，应显示两个清晰分离的斑点。用于限量检查和含量测定时，要求定量峰与相邻峰之间有较好的分离度，除另有规定外，分离度应大于1.0。分离度（R）的计算公式为：R=2(d2-d1)/W1+W2 式中 d1为相邻两峰中后一峰与原点的距离；d2为相邻两峰中前一峰与原点的距离；W1 及W2为相邻两峰各自的峰宽；ABW1W2d1d23.3.重复性重复性 主要用于含量测定.即同一供试品溶液在同一块薄层板上平行点样的待测成分的峰面积测量值的相对相对标准偏差标准偏差(RSD)(RSD)应不大于不大于3.0%3.0%；需显色后测量的相对标准偏差应

15、不大于5.0%。（三）对照物的设置 对照物分为对照品对照品（主要为有效成分和特征性成分的单体）、对照药材对照药材和对照提取物对照提取物三种。对照物的设置有四种方式：设置一种或数种对照品 设置对照提取物 设置一种或数种对照药材 同时设置对照品和对照药材(“双对照双对照”)，它要求样品色谱图中的主斑点应与对照品和对照药材色谱图中的有关斑点相一致，从而大大提高了薄层色谱鉴别法的专属性和整体性，可有效地检出药品是否使用了假冒药材.（四）TLC已广泛用于中药材及其制剂的检验，成为中药鉴别的重要方法和鲜明特色。（五）中国药典大多数品种采用硅胶薄层色谱法，少数使用聚酰胺薄层色谱法和氧化铝色谱法。薄层色谱法还

16、可用于药品的杂质检查和含量测定。影响因素较多，例如供试液的净化程度，吸附剂的性能和薄层板的质量、点样（原点）的质量、展开剂的组成和饱和情况、对照品的纯度、展开的距离、相对湿度和温度等。重点介绍展开剂、相对湿度、温度和pH值的影响。（一）薄层板（一）薄层板 1.市售薄层板（亦称预制薄层板）除另有规定外，一般要求使用市售薄层板。市售薄层板分普通薄层板和高效薄层板两种。常用的有硅胶薄层板、硅胶GF254薄层板、聚酰胺薄层板、氧化铝薄层板等。2.2.自制薄层板自制薄层板 在保证色谱质量的前提下，如需对薄层板进行处理和化学改性，以适应供试品分离的要求时，也可用实验室自制的薄层板，除另有规定外，玻板可用1

17、0cm10cm、10cm15cm、20cm10cm、20cm20cm不同规格的，最常用的固定相有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254等。其颗粒大小，一般要求直径为1040m。薄层板采用湿法制备，即使用涂布器将制好的固定相糊均匀涂布于玻板上。所用涂布器应能使固定相在玻板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。涂布器有手动、半自动、全自动等类型。不同规格的薄层板铺制薄层板（二）点样器材（二）点样器材为了增强药品定性鉴别的可比性，中国药典规定采用定量点样。最常用的是微升毛细管（定容毛细管），为了提高点样效率和质量，还可用点样辅助设备，如点样支架、半自动或自动点样器。（三）展开容器（三）展开容器

18、应使用专用的展开缸，展开缸有水平式及直立式两种类型。上行展开一般使用直立展开缸，它又分为平底式和双槽式，双槽展开缸具有节省溶剂、便于预平衡、可控制展开箱内的湿度等优点。展开缸盖子应能密闭，体积应与薄层板大小相适应。不能用生物标本缸等其它玻璃器皿作为展开缸，否则影响展开质量。全自动点样仪微升毛细管双槽展开缸（四）显色（检视）装置展开后的薄层板，一般需采用相应的显色（检视）方法使板上的被检成分斑点显色。喷雾显色应使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾器，要求用压缩气体使显色剂呈均匀雾状喷出；浸渍显色可用专用玻璃器皿或适宜的展开缸做为浸渍槽；蒸气熏蒸显色可在双槽展开缸或大小适宜的干燥器中进行；荧光检视装置为装有可

19、见光、254nm及365nm紫外光源和相应滤光片的暗箱，可附加摄像设备供拍照图像用，暗箱内光源应有足够的光照度。喷雾显色荧光显色 一般操作步骤为：薄层板制备（制板）点样展开显色与检视（一）薄层板制备（一）薄层板制备 1.1.市售薄层板市售薄层板 临用前一般应在活化分钟。聚酰胺薄膜不需活化。如在贮放期间被空气中杂质污染，使用前可用三氯甲烷、甲醇或二者的混合溶剂在展开缸中上行展开预洗，110活化，放干燥器中备用。2.2.自制薄层板自制薄层板 除另有规定外，将1份固定相和3份水（或0.20.5羧甲基纤维素钠水溶液）在研钵中向同一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻璃板上平稳地移动涂布器

20、进行涂布，取下涂好薄层的玻璃板，置水平台上室温下晾干后，在 烘30分钟活化，立即置干燥器中备用。薄层板一般要求新鲜制备，当天使用。使用前应在反射光及透射光下检查其质量，若板面不均匀、不平整或有麻点、有气泡、有破损及污染等情况，应弃去不用。（二）点样（二）点样 1.1.供试品溶液的制备供试品溶液的制备 主要采用浸渍法、回流以及超声等方法提取，液液萃取法或固液萃取法进行精制。有的成分在药品中是以苷或酯等结合态存在，检验前需水解成游离态再与相应的对照品一同展开分离、鉴别。如万应锭中熊胆的鉴别、定坤丹中人参和三七的鉴别和牛黄上清丸中大黄的鉴别。2.2.原点的点加原点的点加 除另有规定外，在干燥洁净的环

21、境，用专用毛细管或半自动、自动点样器械点样于薄层板上形成原点。原点一般为圆点状或窄细的条带状。原点基线距板底边1015mm，高效板原点基线离底边810mm。圆点状原点直径一般不大于3mm；条带状的宽度一般为510mm。高效板条带宽度为48mm，原点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜，一般不少于8mm，高效板样品间隔不少于5mm。毛细管接触点样时应少量多次点加，才能保证原点小而圆。还需注意勿损伤薄层表面，点加条带原点时应注意条带的均匀性，用喷雾状条带点样器，可保证点样的质量。8mm原点起原点起始线始线5mm815cm11.5cm溶剂前沿溶剂前沿展开剂展开剂液面液面（三）展开（三）展开 点样后

22、的薄层板放入加有展开剂的展开缸中，密闭，一般采用上行一次展开上行一次展开。薄层板浸入展开剂的深度以液面距原点5mm5mm为宜，溶剂前沿达到规定的展距后，取出薄层板，晾干，待检测。一般上行展开展开815cm815cm，高效板上行展开5 58cm8cm。必要时可进行二次展开或双向展开。例如，益气养血口服液中陈皮的薄层鉴别即采用二次展开，先以乙酸乙酯甲醇水吡啶（10017135）展至3cm，取出晾干；再以甲苯乙酸乙酯甲醇水（201011上层）展至8cm，取出晾干。展开前一般需用展开剂对展开缸进行预平衡，即使缸内展开剂气液两相达到动态平衡，该过程亦称“饱和”。为此可在展开缸内加入适量展开剂，密闭，保持

23、1530分钟。预平衡后，迅速将薄层板放入展开缸中，立即密闭，展开。若薄层板需同时预平衡，可将点样后的薄层板放入双槽展开缸的一侧槽中，另一侧槽中加入展开剂，如上法预平衡后，再将展开剂移入放有薄层板的槽中，展开。展开剂要求新鲜配制，不要多次反复使用。展开剂配制后若分层，则应按要求放置分层后取需要的一相（上层或下层）使用。（四）显色与检视（四）显色与检视 1.颜色较深的成分可直接在日光下检视其斑点。2.无色或浅色的成分多用喷雾法或浸渍法以适宜的显色剂显色，或再加热使之显色，在日光下检视。3.有荧光的物质或遇某些试剂可激发荧光的物质可在紫外灯（365nm）下观察荧光色谱。4.有的成分可用试剂的蒸气熏蒸

24、（如碘蒸气、氨蒸气）显色。5.某些无色有紫外吸收且不产生荧光的成分可用荧光淬灭法荧光淬灭法显色。即在含有荧光剂的硅胶板（如硅胶GF254板），在紫外光灯（254nm）下观察板面上该成分形成的荧光淬灭色谱。GF254薄层板GF254薄层板在荧光灯下荧光淬灭法的GF254薄层板薄层色谱图象可采用摄像设备拍照，以光学照片或电子图象的形式保存。也可以用扫描仪记录相应的色谱图。薄层色谱数码相机成像系统 供试品色谱中，在与对照品、对照药材或对照提取物色谱的相应的位置上，显相同颜色或荧光的斑点，则判断为符合规定。（一）六味地黄丸中牡丹皮的鉴别1.丹皮酚；25.六味地黄丸 112.一捻金；13.人参二醇+人参

25、三醇（二）一捻金中人参的鉴别（三）龟龄集中人参的鉴别 14.龟龄集；5.人参对照药材；6.人参皂苷Rb1(S1)、Re(S2)、Rg1(S3)（四）万氏牛黄清心丸中黄连的鉴别 15.万氏牛黄清心丸；6.黄连对照药材；7.小檗碱（五）华佗再造丸薄层色谱图（喷显色剂前的）（喷显色剂后的）1.12.吴茱萸对照药材；2.11.川芎对照药材；310.华佗再造丸第五节第五节 紫外紫外-可见光谱鉴别法可见光谱鉴别法(Ultraviolet and Visible Spectroscopy)(Ultraviolet and Visible Spectroscopy)某些中药或中成药经适当处理后，所得紫外吸收光

26、谱是由其各组分的特征吸收叠加而成的。若将中药制剂作为一个特定的整体，在一定测试条件下，只要各药味及其成分的组成与含量相对稳定，则其紫外吸收光谱具有一定的特征性和重现性，可以用于定性鉴别。两组分的加和紫外吸收光谱分光光度鉴别法简便、灵敏、易普及。但由于紫外光谱分辨率较低，图谱简单，某些不同的样品可能给出极其相似的光谱图，使其在实际工作中受到一定的限制。如果对样品进行前处理，除去干扰成分，则可有效地提高该法的专属性。中国药典仅有少数中成药品种收载了分光光度鉴别法，例如，木香槟榔丸等。中国药典规定以最大吸收波长（max）做为鉴别参数。样品吸收峰波长应在该品种项下 规定的波长2nm以内。复方丹参片紫外

27、谱线组图 将供试品最大吸收波长和药品标准的规定进行比较，二者如果一致，则判定为符合规定。木香槟榔丸 处方：木香、槟榔、枳壳、陈皮、青皮（醋炒）、香附（醋制）、三棱（醋制）、莪术（醋制）取本品粉末4g，置蒸馏瓶中，加水10ml，使供试品湿润后，水蒸汽蒸馏，收集馏液约100ml，照紫外分光光度法（中国药典附录V A）测定，在253nm波长处有最大吸收。（检出挥发性成分）第六节第六节 气相色谱鉴别法气相色谱鉴别法(Gas Chromatography GC)在一定的色谱条件下，相同的物质应具有相同的色谱特性（分配系数）和色谱行为（保留值）。因此，在同一色谱条件下，将供试品溶液和对照品溶液分别注入气相

28、色谱仪，对二者的气相色谱图进行比对，根据供试品是否给出与对照品保留时间相同的色谱峰，从而对样品作出定性分析。这种方法可称为保留时间比较法，中国药典即采用此法对某些中成药进行真伪鉴别。保留时间（tR）系指从进样开始，到该组分色谱峰顶点的时间间隔。色谱峰示意图 气相色谱法具有高分辨率，高灵敏度、快速、准确等特点，尤其适合分析制剂中的挥发性成分，如麝香酮、薄荷醇、冰片、水杨酸甲酯等。一般情况下气相色谱不适合分析蒸汽压较低的也即挥发性较小的成分，因此该法在实际工作中具有一定的局限性。气 相 色 谱 仪 比较供试品与对照品色谱图，供试品呈现与对照品保留时间相同的色谱带，则判断为符合药品标准规定。所谓保留

29、时间相同是指基本相同，彼此相差百分之几秒是允许的。（一）少林风湿跌打膏（二）安宫牛黄丸中麝香的鉴别-麝香酮安宫牛黄丸第七节第七节 高效液相色谱鉴别法高效液相色谱鉴别法（High Performance Liquid Chromatography HPLC)高效液相色谱法鉴别在原理和操作上与气相色谱鉴别法有许多相似之处。中国药典采用保留时间比较法，即在相同的色谱条件下，比较样品和对照品的色谱峰的保留时间（tR）是否一致，从而对被检成分（药味）的存在情况做出判断。例如，六味地黄丸中芍药苷和四君子丸中甘草酸的鉴别。六味地黄丸中芍药苷的高效液相色谱图(a.芍药苷)A.芍药苷对 照品 B.六味地黄丸供试

30、品标准品 高效液相色谱法不受样品挥发性的限制，固定相、流动相的选择范围较宽，检测手段多样，加之高效快速，微量，自动化程度高等特点，所以在药物分析工作中比气相色谱法应用更为广泛，在中药制剂鉴别中的应用也日益增多。不过，目前在中药制剂质量标准中，一般很少单独使用该法做鉴别，而是多与含量测定结合进行。（一）龙牡壮骨颗粒中维生素D2鉴别（P82）（二）百令胶囊的鉴别（05版新增内容）本品系由发酵虫草菌粉（CS-C-Q80）制成。采用高效液相色谱法鉴别其中的核苷类成分。核苷类成分的鉴别：核苷类成分的鉴别：样品先用乙醚脱脂，再用0.5磷酸溶液超声波提取制成核苷供试液。用反相高效液相色谱法测定，以乙腈为流动相A，以0.04mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相B，梯度洗脱，供试品色谱应呈现与对照药材色谱保留时间相同的六个主色谱峰，与腺苷、尿苷对照品保留时间相同的色谱峰。时间（分钟）流动相A（）流动相B（）015 0 100 1545 015 10085