第02章 药物的鉴别试验.ppt

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1、第二章 药物的鉴别试验 药物分析课件 基本要求 掌握 鉴别试验的目的 药物性状和物理常数的测定及其对药物鉴别的作用 常用鉴别方法与选择 熟悉 鉴别试验的影响因素与注意事项 了解 鉴别试验方法的验证 基本内容 一 概述二 药物鉴别的项目三 药物鉴别的方法四 鉴别试验的条件练习与思考 一 概述 鉴别试验 identificationtest 根据药物的分子结构 理化性质 采用化学 物理化学或生物学方法来判断药物的真伪 二 药物鉴别的项目 药物的鉴别试验包括 性状和鉴别 一 性状 definition 聚集状态 晶形 1 外观 色泽 臭 味 例维生素B1Ch P 2010 性状 本品为白色结晶或结晶

2、性粉末 有微弱的特臭 味苦 干燥品在空气中迅速吸收约4 的水分 色泽 聚集状态 臭 味 2 溶解度 极易溶 1份溶质在不到1份溶剂中溶解易溶 1份溶质在1份 不到10份溶剂中溶解溶解 1份溶质在10份 不到30份溶剂中溶解略溶 1份溶质在30份 不到100份溶剂中溶解微溶 在100份 不到1000份溶剂中溶解极微溶解 在1000份 不到10000份溶剂中溶解几乎不溶或不溶 10000份溶剂中不完全溶 凡例项目与要求Ch P 2010 2 溶解度是药品的一种物理性质 各品种项下选用的部分溶剂及其在该溶剂中的溶解性能 可供精制或制备溶液时参考 例尼莫地平Ch P 2010 性状 本品在丙酮 三氯甲

3、烷或乙酸乙酯中易溶 在乙醇中溶解 在乙醚中微溶 在水中几乎不溶 其测定结果不仅对药品具有鉴别意义 也可反映药品的纯度 是评价药品质量的主要指标之一 3 物理常数 相对密度 馏程 熔点 凝点 比旋度 折光率 黏度 吸收系数 碘值 皂化值 酸值 例扑米酮Ch P 2010 性状 熔点本品的熔点 附录 C 为280 284 2 比旋度 指在一定波长下 偏振光透过1dm且每1ml中含有旋光性物质1g的溶液时测得的旋光度 可用于鉴别药物 检查药物的纯度和含量测定 例维生素CCh P 2010 性状 比旋度取本品 精密称定 加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含0 10g的溶液 依法测定 比旋度为 20 5

4、 21 5 例盐酸氨溴索Ch P 2010 性状 吸收系数精密称取本品适量 加0 01mol L盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含25 g的溶液 照紫外 可见分光光度法 在244nm的波长处测定吸光度 吸收系数 为233 247 二 一般鉴别试验 generalidentificationtest ChP附录中有 丙二酰脲类 托烷生物碱类 芳香第一胺类 有机氟类 无机金属类 Na K Li Ca Ba Fe Al Zn Cu Ag Hg等 有机酸盐类 水杨酸盐 无酸盐类 只能证实为某一类药物 不能证实为某一种药物 1 有机氟化物 有机氟 氧瓶燃烧 无机氟离子 pH4 3 茜素氟蓝 硝酸亚

5、铈 蓝紫色络合物 2 有机酸盐 1 水杨酸 水杨酸 FeCl3 中性条件 弱酸性条件 红色配位化合物 紫色配位化合物 酚 OH 2 酒石酸盐 供试品溶液 中性 氨制硝酸银 水浴中 还原性 3 芳香第一胺类 4 托烷生物碱类具有莨菪酸结构 有Vitali反应 显紫色 5 无机金属盐 1 钠盐 钾盐 钙盐的焰色反应Na 显鲜黄色K 显紫色Ca2 显砖红色 2 铵盐 供试品 NaOH 氨气 臭 氨臭 6 无机酸根氯化物 硫酸盐 如 母核相同 取代基不同 一般鉴别试验 某一类药物 专属鉴别实验 此类药物中的某一种药物 三 专属鉴别试验 specificidentificationtest 苯巴比妥 司

6、可巴比妥钠 巴比妥 例司可巴比妥钠Ch P 2010 鉴别 2 取供试品0 1g 加水10ml溶解后 加碘试液2ml 所显棕黄色在5分钟内消失 4 本品显丙二酰脲类的鉴别反应 附录 例苯巴比妥Ch P 2010 鉴别 1 取本品约10mg 加硫酸2滴与亚硝酸钠约5mg 即显橙黄色 随即转橙红色 4 本品显丙二酰脲类的鉴别反应 附录 三 鉴别方法 一 化学鉴别法 要求 专属性强 再现性好 灵敏度高 操作简便快速 例阿司匹林Ch P 2010 鉴别 1 取本品约0 1g 加水10ml 煮沸 放冷 加三氯化铁试液1滴 即显紫堇色 例尼可刹米Ch P 2010 鉴别 3 取本品2滴 加水1ml 摇匀

7、加硫酸铜试液2滴与硫氰酸胺试液3滴 即生成草绿色沉淀 例维生素B1Ch P 2010 鉴别 1 取本品约5mg 加氢氧化钠试液2 5ml溶解后 加铁氰化钾试液0 5ml与正丁醇5ml 强力振摇2分钟 放置使分层 上面的醇层显强烈的蓝色荧光 加酸使成酸性 荧光即消失 再加碱使成碱性 荧光又显出 例尼可刹米Ch P 2010 鉴别 1 取本品10滴 加氢氧化钠试液3ml 加热 即发生二乙胺的臭气 能使湿润的红色石蕊试纸变蓝色 制备衍生物测定熔点法药物 试剂新化合物有一定mp 药物酸化或碱化生成游离酸或碱 操作繁琐费时间 应用较少 二 光谱鉴别法 1 紫外光谱鉴别法 紫外光谱图 原理 缺点 光谱较简

8、单 曲线性状变化不大 专属性小于IR 特点 具有一定的专属性 仪器普及率高 操作简单 应用范围广 方法 例盐酸氯丙嗪Ch P 2010 鉴别 2 取本品 加盐酸溶液 9 1000 制成每1ml中约含5 g的溶液 照紫外 可见分光光度法 附录 A 测定 在254nm与306nm的波长处有最大吸收 在254nm的波长处吸光度约为0 46 例维生素B2Ch P 2010 鉴别 2 取含量测定项下的溶液 照紫外 可见分光光度法 附录 A 测定 在267nm 375nm与444nm的波长处有最大吸收 375nm波长处的吸光度与267nm波长处的吸光度的比值应为0 36 0 39 2 红外光谱鉴别法 特点

9、 Ch P标准图谱对照法 药品红外光谱集 USP对照品对照法 方法 试样制备方法 压片法 糊法 膜法 溶液法 基线及取样量 试样的制备方法 压片法 供试品 约1mg 干燥KBr KCl 约200mg 均匀透明片无明显颗粒供试片 同法制空白KBr KCl片 做空白校正 扣除背景干扰 糊法 供试品 约5mg 滴加少量液体石蜡或其他液体 制成糊状物 玛瑙研钵 取适量夹于两个KBr片 150mg 片 之间 供试片 KBr 约300mg 制成空白片 作背景校正 膜法供试品多为高分子聚合物 可做成液膜铺展于适宜的盐片上 溶液法液体供试品 或溶于适宜的溶剂内 制成1 10 的溶液 置于0 1 0 5mm厚的

10、液体池中 即可测得 原料药的鉴别 实测光谱与光谱集光谱不一致 1 注意多晶型问题 转晶 2 使用对照品 和供试品用相同溶剂重结晶 3 用规定的特定的药用晶型 4 改变制样方法 固体制样 溶液制样 制剂的鉴别 提取分离 溶剂要适宜 辅料干扰要少 避免晶型转变 辅料无干扰 晶型无变化 辅料无干扰 晶型有变化 晶型无变化 辅料有干扰 晶型有变化 辅料有干扰 制剂的鉴别 方法总结 直接提取 如盐酸四环素片 热乙醇提取 盐的主成分提取 如磷酸氯喹片 酸的主成分提取 如吉非贝齐胶囊 直接取样 如氨甲环酸胶囊 其它方法 例阿司匹林Ch P 2010 鉴别 3 本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱 光谱集5图

11、一致 对比时应注意的问题 P80 1 5 原理 不同物质在不同色谱条件下 产生各自的特征色谱行为 与对照品在相同条件下进行色谱分离 并比较其保留行为和检测结果是否一致来验证真伪 三 色谱鉴别法 Rf的最佳范围0 3 0 5 可用范围0 2 0 8 薄层色谱法比移值 Rf 定性参数 例维生素B6Ch P 2010 鉴别 2 在含量测定项下记录的色谱图中 供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致 四 显微鉴别法 选择原则 1应选有专属性的特征进行鉴别 2多来源的药材应选择共有的特征进行鉴别 用显微镜观察药材及含药材粉末的中成药的组织构造 细胞形状以及化合物的特征 以鉴别中药的真伪

12、具有快速 简便 覆盖面大等特点 大 小决明子及望江南种皮横切面详图 400 大决明子 小决明子 望江南 1 种皮角质层2 栅状细胞表面观3 栅状细胞横切面观4 支持细胞表面观5 支持细胞6 营养层薄壁细胞7 种皮薄壁细胞8 胚乳细胞9 子叶碎片 大 小决明子及望江南粉末图 400 五 生物学鉴别法 利用微生物或实验动物进行鉴别的方法 例胰岛素Ch P 2005 鉴别 3 取本品适量 加用酸调节至pH值为2 5 3 0的水制成每1ml中含5单位的溶液 在20 30 条件下 取体重20 24g的小鼠5只 按每20g体重皮下注射上述溶液0 25ml 注射后2小时内 至少应有4只小鼠发生惊厥 立即给惊

13、厥的小鼠腹腔注射10 葡萄糖注射液1ml 应能使惊厥停止 六 指纹图谱与特征图谱鉴别法 菊花提取物的指纹图谱 1 绿原酸2 黄芩苷3 木犀草素4 芹菜素 1 滁菊 产地 滁州市全椒县 日期 2011 3 2 黄山贡菊 产地 黄山市歙县 日期 2011 4 3 共有模式图1滁菊 黄山贡菊及其共有模式指纹图谱 图10批瓜蒌薤白颗粒与10批瓜蒌药材乙酸乙酯部位指纹图谱1 10 瓜蒌薤白颗粒 11 20 瓜蒌 图乙酸乙酯部位共有模式图谱 图10批瓜蒌薤白颗粒与10批薤白药材正丁醇部位指纹图谱1 10 瓜蒌薤白颗粒 11 20 薤白 图正丁醇部位共有模式图谱 四 鉴别试验条件 一 溶液的浓度溶液的浓度主

14、要指被鉴别物质的浓度 其大小影响结果的判断 如化学法中要观察沉淀 颜色 UV法中 max A 二 溶液的温度温度过高可使产物分解 导致颜色变浅 甚至观察不到结果 三 溶液的酸碱度使反应物处于活化状态 反应产物处于稳定和易于观察状态 四 试验时间有机化合物的化学反应较慢 需要一定的反应时间和条件 五 干扰成分的存在药物制剂的鉴别 其它成分则会干扰检查结果的现象观察 返回 练习与思考 1 简述鉴别试验的定义 2 药物的鉴别包括哪些项目 3 药物的鉴别可采用哪些方法 4 吸收系数有几种表示方法 中国药典收载的哪种形式 一 最佳选择题 1 鉴别试验鉴别的药物是 A 未知物B 储藏在标签容器中的药物C 结构不明确的药物D B CE A B B 2 钙盐焰色反应的颜色是 A 砖红色B 鲜黄色C 紫色D 蓝色E 棕色 A 3 药品的鉴别是证明A 未知药物的真伪B 已知药物的真伪C 已知药物的疗效D 药物的纯度E 药物的稳定性 二 多项选择题 4 影响鉴别试验的主要因素有 A 溶液的浓度B 溶液的温度C 溶液的酸碱度D 试验时间E 干扰成分的存在 A B C D E